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厌氧培养箱操作室厌氧环境的形成

发布时间:2016-06-14 点击量:912
 厌氧培养箱亦称厌氧工作站或厌氧手套箱。厌氧培养箱是一种在无氧环境条件下进行细菌培养及操作的装置。它能提供严格的厌氧状态恒定的温度培养条件和具有一个系统化、科学化的工作区域。
(一)操作室厌氧环境形成:
1. 按使用要求放置好必要的附件和器具,并向操作室内放入二个无毒塑料袋;
2. 通电源开照明灯,开温控仪,调节所需温度及安全温度;
3. 操作室内放入1000g钯粒(封闭)和500g干燥剂,并放入美兰指示剂(封闭);
4. 关紧取样室内外门,并抽真空校验;
5. 操作室内*次置换(氮气置换):
  A. 先用橡皮管插入操作室内进气口,另一头插入塑料袋;
  B. 接通氮气进气路,打开氮气控制阀1,使二只塑料袋充足氮气,关闭阀门1,然后扎紧袋口;
  C. 把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧;
  D. 把塑料袋内氮气渐渐放于操作室内,至全部放出。
6. 操作室第二次置换(氮气置换)重复一次充氮过程,取样室先抽真空,并注意随时用脚踏开关开闭排气。
7. 操作室第三次置换(混合气体置换):(混合气体配比为N2 85%、H2 10%、CO2 5%)
  A. 调换气路打开混合气阀3进气,充气时取样室先抽真空,并随时用脚踏开关开闭排气;
  B. 混合气充满塑料袋后,关掉混合气阀并打开阀5,使混合气经过流量计,调整流量计,流量为每分钟10ml左右;
  C. 把塑料袋内混合气渐渐排于操作室内;
  D. 通过三次换气后,操作室内气体含氧量已处于极微量状态。
8. 操作室内打开粑粒除氧剂,接通除氧催化器电源进行催化除氧,一小时后开美兰指示剂(美兰安瓶)观察其变色情况,不变色为操作室内达到厌氧环境;
9. 开紫外线灭菌灯,室内进行灭菌处理,灭菌时间按具体实验自定。
 
(二)菌种的置入和培养:
1. 检查取样室内门并关紧之;
2. 打开取样室外门,将菌种放入取样室后即关上外门;
3. 取样室充氮置换三次过程:打开真空泵,先抽真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,然后人工打开氮气阀2进气,使指针回复零位,关掉阀2。第二次重复操作一次。第三次操作时,使真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,然后打开阀4进混合气,使指针回复零位,后掉阀4。取样室充氮置换三次过程结束;
4. 如选定真空度较低就需要增加置换的次数;
5. 取样室内外门开启、关紧,再抽低真空度100ml汞柱(13kPa)检验;
6. 厌氧培养箱需要长期连续使用的条件:
  A. 每天在操作室内打开美兰指示剂观察,如不正常就必须重新换气;
  B. 要长期连续输入微量的混合气体,使补进的氮气能和微量的氧结合通过催化吸收,保证室内厌氧状态,补入混合气流量选定为每分钟10ml左右;
  C. 连续培养运行一天,更换一次除氧剂和干燥剂。
7. 操作室内培养室内室温度可任意选择和控制。
8. 混合气瓶、氮气瓶输出压力调整:调节减压阀,使输出压力0.1Mpa左右。
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